Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中的逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道自身抗体到浮现1改进型乳癌临床副作用的困难重重亲率在儿童时代就有很好的描述，多个呼吸道自身抗体乙型肝炎的儿童；还有70%在血清转成后10短期内患上乳癌，而随访15年的儿童这一%-减小到84%。相比来说之下，占临床1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的患病机制还从未给予适当的研究成果。

愈发多的人开始用于再行系统来概念1改进型乳癌的困难重重：个体在浮现多种呼吸道自身抗体时进到第1前期，浮现血糖极度时进到第2前期，浮现副作用时进到第3前期。一些多发呼吸道自身抗体乙型肝炎的个体，在1期和2期，困难重重更太快，并拓展为患病的1改进型乳癌。我们此前描述了一组成员在首次检验到多种呼吸道自身抗体试样后数10年无乳癌的极太快困难重重者，这组成员病症人数少，但特征非常确实。随后，我们发现呼吸道自身抗体专一性CD8+T蛋白底物在困难重重极快的病症之中整体不实际上，但在未来会患病和经常性实际上的乳癌病症之中很非常容易检验到。这确实证明，与困难重重病症相比来说，这些病症自身免疫底物的恒定减弱。

早期研究成果证明，尽管恒定性T蛋白(Treg)数量正常，但乳癌病症实际上一些整体功能缺陷，其之中包括对IL-2的底物潜能增大。此外，乳癌病症之中的振荡CD4+T蛋白确实对恒定不具抵抗性，显出为振荡T蛋白的诱发减弱，自然显现出的Treg和体外显现出的抑止Treg，以及抗体经历的CD4+T蛋白之中IL-2底物减弱。本研究成果的用意是描述了CD4+恒定性T蛋白(Treg)在这群人极极快困难重重者之中的特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁下述确诊的病症亲属之中检验1改进型乳癌的危险诱因。我们此前描述了经常性极快困难重重者的特征，他们保有多重呼吸道自身抗体乙型肝炎超过10年，但从未浮现乳癌的临床副作用，太快性或非来进行性自身免疫。随后，10名一直保有无乳癌并愿意共享大量血液试样的极快困难重重者划入T和B蛋白整体功能研究成果。在以外的研究成果之中，8名太快困难重重者(SP组成员)，之中位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的呼吸道自身抗体乙型肝炎。所有的与会者都保有稳定1改进型乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗体对某些抗体的乙型肝炎底物，然而，一名病症已经保有稳定2期数6年，但从未浮现临床副作用，一名病症被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集物理试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究成果之中对该诱导来进行了除此以外评估。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多数值流式蛋白练成和T蛋白诱发试验评估诱导之中Treg的Hz、表改进型和整体功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)来进行无监督聚类研究成果，评估Treg表改进型。

结果：与生活品质诱导相比来说，来自太快困难重重体的遗忘CD4+T蛋白的监督聚类推断，激活的遗忘CD4+ TregHz减小，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)表述减小有关。一名HbA1c升高的病症与困难重重极快者和意味着的对照组成员相比来说，Treg磬有所各有不同。整体功能研究成果证明，与生活品质诱导相比来说，来自极快困难重重体的Treg介导的CD4+振荡T蛋白诱发轻微受损。显出为对振荡CD4+T蛋白CD25和CD134表述的诱发减小。

示意图1 熟悉的表改进型研究成果推断，CD4+Treg亚改进型在太快困难重重字段之中减小。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标有物表述解剖出10个元簇:遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个各有不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个终端代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在终端组成员周围上色。每个终端之中的饼示意图对此单个标有的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体标有表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)作用于示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)相比丰度为每个metacluster盒该线示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白(l)。绿色格孙子代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩筛选。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模改进型证实，TregHz的减小是困难重重极快的标志。分级制度相关联(a - f)和柑橘研究成果(g-k)较为SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(小点)和SP(星点)组成员以及诱导SP 606(绿色)之中CD25+ cd127的Hz综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联孙子集的盒该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度后处理，箭头醒目的簇被识别为SP和HD字段相互间的各有不同。(j)盒该线示意图推断了在SP(星点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比丰度(%-)。(k)直方示意图推断每个簇的表改进型(粉色)和Treg标有相比表述与背景表述(白色);上列，CPUTreg_3;上头一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇之中标有的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩筛选

示意图3 与生活品质献血者相比来说，困难重重极快者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T蛋白元簇(遗忘T蛋白_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表述标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表述热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表述串联，推断直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和筛选，p< 0.07(绿色)所有诱导包括，p< 0.05(白色)诱导SP 606和意味着的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从分级制度相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(绿色)串联，推断直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩筛选

示意图4 来自极快困难重重的CD4+ treg蛋白控制振荡CD4+T蛋白的潜能增大。SP组成员用白色的该线和格孙子对此，HD组成员用银色的该线和格孙子对此，绿色的该线/格孙子对此诱导sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按掩蔽的%-校准。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，人才3翌日来进行流式蛋白练成检验。(a-d)与CD4+反之亦然者相比应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。用于乙型肝炎对照(激活的响应蛋白仅有treg)计算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

示意图5 振荡CD4+T蛋白对极快困难重重的T蛋白活化的诱发更敏感。SP组成员用白色的该线和格孙子对此，HD组成员用银色的该线和格孙子对此，绿色的该线/格孙子对此诱导sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按掩蔽的%-校准。用抗CD3 /28微珠活化蛋白，人才3翌日来进行流式蛋白练成(CD25反染)和蛋白因孙子研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者都由人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

结论：我们得出的结论是，来自极快困难重重孙子的活化遗忘CD4+Treg在GITR表述之中给予了扩展和多样，特别强调了进一步研究成果Treg在1改进型乳癌效用个体之中的表型的必要性。

原意原意：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28